4.無菌條件下，轉(zhuǎn)移懸浮細胞到25 cm2或75 cm2的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶大小取決于細胞株（見產(chǎn)品說明書）。

　　5.按照產(chǎn)品說明書中推薦的溫度和CO2濃度培養(yǎng)細胞，直到細胞可以傳代培養(yǎng)。

　　原代ATCC細胞來源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物，是多種類型細胞的混合物，保留了其來源組織的特點。

　　一段時間后，原代培養(yǎng)的細胞會達到融合狀態(tài)，即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細胞擴增都被覆蓋。在此之后，ATCC細胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個細胞并且傳代（分裂，傳代或轉(zhuǎn)移）。在*次傳代以后，培養(yǎng)物通常被稱為一個細胞系。每一次傳代培養(yǎng)，細胞群體由于快速生長的細胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細胞也可以通過克隆，從培養(yǎng)物中選出。

　　二倍體細胞很少可以倍增超過幾代。它們只有有限的復(fù)制能力，并且在細胞倍增20至80次后開始減緩并zui終停止分裂。zui近的證據(jù)表明，某些細胞中觀察到的細胞衰老與預(yù)計的復(fù)制性衰老不同，可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示，對某些物種的細胞系（尤其是人源的）即使生長在改進的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細胞分裂時染色體末端（端粒）縮短調(diào)控的。

　　相反，傳代（或永生化）細胞具有無限增殖能力。這些細胞系通過多種手段中的其中一種來使細胞永生化或轉(zhuǎn)化。許多傳代細胞來自腫瘤組織。ATCC收集的大部分細胞系是傳代的，只有少數(shù)如CCD-1117Sk人皮膚成纖維細胞（ATCC CRL-2465?）或CCD-18Co人結(jié)腸細胞（ATCC CRL-1459?）是有限傳代的。更多關(guān)于ATCC細胞永生化的信息可以在ATCC上查找。

　　正如以上提到的，細胞系要么在培養(yǎng)瓶表面貼壁生長（錨定依賴性）要么懸浮生長（非錨定依賴性）。ATCC細胞的生長和分裂，通常遵循一個由四個階段組成的特征性增長模式：停滯期，對數(shù)期（指數(shù)期），平穩(wěn)期（平臺期）和衰退期。

　　停滯期——將細胞接種至培養(yǎng)瓶之后，細胞逐步恢復(fù)的同時，緩慢生長。

　　對數(shù)期（指數(shù)期）——細胞進入一個對數(shù)生長的時期，一直持續(xù)到整個生長表面被占滿或細胞密度超過培養(yǎng)基提供營養(yǎng)的能力。

　　平穩(wěn)期——細胞增殖減慢或停止。

　　衰退期——如果不更換培養(yǎng)基且細胞數(shù)量不減少，細胞活力會下降，并出現(xiàn)細胞死亡。

　　為了確保ATCC細胞活力，遺傳穩(wěn)定性和表型穩(wěn)定，必須使細胞保持在對數(shù)期。這意味著細胞需要在進入平穩(wěn)增長階段之前，或在單層細胞長成100%融合之前，或在懸浮細胞達到推薦的zui大細胞密度之前定期進行傳代培養(yǎng)。為每個細胞系繪制生長曲線，對于測定該細胞系的生長特性是必要的。